Содержание материала

Технология создания базисных маточников из оздоровленного in vitro посадочного материала предусматривает:

  1. выделение меристем;
  2. этап ввода эксплантов в культуру:

а)          на твердой питательной среде,
б)           на жидкой питательной среде;

  1. этап собственно микроразмножения;
  2. этап укоренения;
  3. этап микрочеренкования;
  4. этап адаптации к нестерильным условиям СУВР;
  5. закладка базисного маточника на постоянном месте (открытом и защищенном грунте) песков оздоровленным посадочным материалом.

На сегодняшний день производство такого посадочного материала винограда высших категорий качества в РФ отсутствует и в его получении имеются определенные трудности. Это прежде всего:

    1. Сложная схема оздоровления, клонального микроразмножения посадочного материала высших категорий качества, требующая серьезного материально-технического обеспечения.
    2. Продолжительный срок (4-5 лет) создания эксплуатационных маточников при использовании только саженцев оздоровленных и размноженных in vitro.
    3. Объем производства сертифицированного посадочного материала не обеспечивает ежегодные потребности в закладке новых насаждений.

Особенности разрабатываемой технологии заключаются в том, что в культуру in vitro вводятся экспланты с маточных кустов как подвоев, так и привоев без визуальных признаков вирусных заболеваний и оттестированные на их наличие на травянистых индикаторах.

3.1. Организация территории Центра по производству базисного и сертифицированного посадочного материала

Учитывая уникальные особенности Нижне-Кундрюченского песчаного массива Усть-Донецкого района Ростовской области, по пространственной изоляции от близлежащих виноградников, по отсутствию нематод и других переносчиков вирусных заболеваний, создан в этом месте Центр по производству сертифицированного посадочного материала. Он должен включать базисные маточники для производства супер-супер элиты ССЭ, сертифицированные маточники для производства супер-элиты СЭ, школку по выращиванию сертифицированного посадочного материала.
План организации территории был разработан с учетом почвенной карты и данных вертикальной съемки. Под закладку базисных маточников было отведено 8 клеток, каждая площадью 5 га.
При организации Центра по производству сертифицированного посадочного материала была произведена закладка из оздоровленных in vitro растений винограда, трех типов базисных маточников, выполняющих различные задачи:

  1. Базисный маточник подвойных сортов винограда для использования подвойной лозы для производства привитого сертифицированного посадочного материала.
  2. Базисный маточник ценных сортов винограда, используемых для качественного виноделия, для получения глазкового и черенкового материала на прививку в качестве привоя и, в конечном итоге, для получения привитых сертифицированных саженцев.
  3. Базисный маточник перспективных сортов винограда с групповой устойчивостью и толерантных к филлоксере для производства корнесобственного сертифицированного посадочного материала.

Закладка всех этих маточников произведена оздоровленными в культуре in vitro вегетирующими саженцами с закрытой корневой системой, оттестированными на наличие вирусных заболеваний.

3.2. Подготовка почвы, посадка и уход за базисными маточниками подвойных лоз

Подготовка почвы под закладку базисных маточников на песках заключается в подъеме плантажа на глубину 60-65 см, под который вносятся только минеральные удобрения из расчета N120, P160, К120, исключая органические удобрения.
Почву готовят с осени в количестве, необходимом для закладки маточников в течение двух лет с тем, чтобы избежать переноса песков. Затем почву хорошо выравнивают, ранней весной боронуют для сохранения влаги, культивируют по мере появления сорняков и в дальнейшем содержат в чистом паровом состоянии. Закладку базисных маточников необходимо производить только после того, как плантаж достаточно уплотнится, то есть не раньше чем через 5-6 месяцев после его поднятия.
Оздоровленные вегетирующие саженцы с закрытой корневой системой, полученные в лаборатории биотехнологии, проходят адаптацию к нестерильным условиям и доращивание на СУВР в течение 20-40 дней. С наступлением благоприятной теплой погоды после окончания периода возвратных заморозков в конце мая (третья декада) они транспортируются в Нижне-Кундрюченское отделение опытного поля, где в течение недели в затененной лесополосе проходят адаптацию и закалку в естественных условиях.
Посадку саженцев осуществляли в заранее подготовленную (за 1-2 дня) траншею. Глубина траншеи - 55-60 см, ширина 35-40 см. Стенки и дно траншеи устилали мульчпленкой. Саженцы в торфопорегнойных горшочках высаживали через 75 см друг от друга в лунки, проделанные через мульчпленку на глубину высоты горшочка так, чтобы он полностью скрылся под мульчпленкой (рис. 1).
Сразу после посадки производят вегетационный полив из расчета не менее трех литров воды на растение. В траншее, где температура почвы довольно высокая, создаются условия микроклимата, способствующие быстрой адаптации, 100% приживаемости и интенсивному росту. За счет интенсивного роста, выгонки корнештамба обеспечивается необходимая глубина посадки, предохраняющая от вымерзания корневую систему на песчаной почве (рис. 2).
Глубина посадки вегетирующих саженцев зависела от морозостойкости сорта подвоя. Подвойные сорта с повышенной морозоустойчивостью корней: Рипария х Рупестрис 101-14, Рипария Глуар, Рупестрис дю Ло высаживали на глубину 35-45 см, а менее устойчивые к морозу: Кобер 5ББ, Кречунел, Рихтер 110, Феркаль, Виерул-3 на глубину 45-50 см. Расстояние между рядами 3 м, то есть закладка базисного маточника подвойных лоз вегетирующим безвирусным посадочным материалом производилась по схеме 3,0 х 0,5: на 50 м высаживалось 100 растений, на 100 м - 200 растений, на один гектар 33 ряда х 200 = 6600 растений (рис. 3).

Развитие растений в траншеях
Рис. 2. Развитие растений в траншеях: а) начальное; б) последующее
Посадка оздоровленных саженцев в траншеи
Рис. 1. Посадка оздоровленных саженцев в траншеи

вид базисного маточника
Рис. 3. Общий вид базисного маточника

В первый год вегетации растения поливают малыми нормами - 5-8 л на растение, но довольно часто, 3-5 поливов за вегетацию и более, в зависимости от погодных условий. Почву рыхлят в междурядьях культиватором ПPBH-3, не допуская образования корки и сорняков.
При уходе за растениями производят обломку лишних побегов, оставляя один лидер, который интенсивно растет. За счет интенсивного прироста формируется корнештамб, обеспечивающий необходимую глубину посадки. Благоприятный водный и температурный режим в траншеях с мульчпленкой обеспечивает интенсивный рост растений и наращивание мощной пяточной корневой системы куста в первый же год. В пустой траншее на корнештамбе корни не образуются, благодаря чему отпадает необходимость в проведении катаровок.
Инвентаризация насаждений, проведенная на следующий год после посадки, показала 98 % приживаемость растений.

3.3. Система ведения и формирования кустов и устройство опор

Когда саженцы окажутся на поверхности почвы и их прирост достигнет 8-10 см, производят прищипку верхушек, удаляя 3-5 листьев верхнего прироста. После прищипки на молодом кусте развивается несколько побегов, их удаляют и оставляют 3-4 интенсивно растущих побега, на которых проводят обломку появившихся пасынков. Таких зеленых операций приходится делать две или три, тем самым, формируя мощные качественные побеги.
Осенью, когда лоза вызреет, каждый из побегов подрезают на рожки с 3-4 глазками и производят укрывку на зиму, создавая вал 25- 30 см путем окучивания ITPBH-3. Весной производят пневмооткрывку. На второй год из каждого рожка (короткого побега) развиваются 3-4 побега или 12-16 побегов на куст. На третий год мы имеем возможность оставлять 5-6 рожков, на которых получить 18-24 побега. Все эти побеги как во вторую, так и в последующие вегетации подлежат прививке окулировкой вприклад зеленым глазком с пробуждением (неприжившиеся перепрививаются спящим глазком).

3.4. Базисный маточник привойных сортов винограда, используемых для высококачественного виноделия

Базисный маточник высокоценных сортов винограда был заложен для использования глазкового и черенкового материала на прививку с целью производства привитых сертифицированных саженцев необходимых сортов. Закладка маточника осуществлялась в открытом грунте на песках по той же технологии, что и закладка базисного маточника подвоев. Оздоровленные вегетирующие саженцы с закрытой корневой системой высаживали в траншеи с мульчпленкой глубиной 55-60 см, шириной 35-40 см. Площадь посадки 3 * 0,75 м. Уход за маточными растениями заключался в выгонке корнештамба, обеспечивающего глубину посадки 60 см, прищипке его над поверхностью почвы, воспитании 2-4 хорошо развитых побегов.
За период вегетации проводили 3-4 полива из расчета 3-5 л воды на растение. Вместе с поливом вносили минеральные подкормки NPK.
Осенью, когда лоза вызрела, ее укладывали по оси ряда в обе стороны, пришпиливая к почве, а затем укрыли чаканными и камышевыми матами, изготовленными на месте. Поверхность матов укрыли песчаной почвой на высоту 25-30 см.
В первый год была установлена деревянная опора и натянута пятипроволочная шпалера: первая проволока на высоте 50 см; вторая проволока - двухпроволочная под заводку через 70 см; третья проволока - двухпроволочная под заводку еще через 70 см.
Весной была произведена открывка растений, пришпиленные лозы обрезаны на 8 глазков и оставлены уложенными и пришпиленными по оси ряда. С нарастанием температуры воздуха и почвы растения интенсивно трогаются в рост, и с каждого глазка вырастает полноценная лоза, которая уже во второй год вегетации дает возможность заготовить до 24 стандартных черенков, пригодных для использования глазков на прививку.

3.5 Базисный маточник перспективных сортов винограда для производства корнесобственного посадочного материала

Базисный маточник перспективных сортов винограда отечественной и зарубежной селекции с групповой устойчивостью (к морозу, болезням, филлоксере) с целью получения корнесобственного посадочного материала закладывался на песках по аналогичной технологии, что и предыдущие базисные маточники подвойных и привойных высокоценных сортов винограда оздоровленными вегетирующими саженцами с закрытой корневой системой. Технология формирования, ухода за маточными кустами и укрывки на зиму в первый год также соответствовала формированию и уходу за кустами маточника привойных лоз. В первый же год была установлена опора с пятипроволочной шпалерой под заводку. Весной второго года пневмоагрегатом проведена открывка пришпиленных рукавов.
С наступлением теплой погоды глазки на рукавах трогаются в рост и интенсивно растут. Когда зеленые побеги достигают длины 60 см, у основания побега проводят кольцевание и последующее окучивание тракторным агрегатом ПРВН-3, создавая вал высотой 30-35 см. По образовавшимся бороздам проводят поливы, поддерживая хорошую влагоемкость вала для роста и развития корневой системы. В течение вегетации на побегах проводят пасынкование и завод их между проволок. Прирост побегов в зависимости от сортового состава и срока высадки оздоровленных саженцев составил 1,2-2,5 м.
Осенью, когда лоза вызреет, производят разокучивание пневмоагрегатом и срезают корневую систему длиной 15-25 см и побег ниже кольцевания на 2-3 см. Таким образом получают корнесобственный саженец. Верхний прирост лозы срезают на высоте 70 см, а остальную часть прироста используют на заготовку черенков для дальнейшего выращивания оздоровленного посадочного материала в школке.
Таким образом, разработаны и осуществлены способы закладки трех типов маточников базисного посадочного материала винограда, направленные на ускоренное его размножение.

3.6. Питомник сертифицированного посадочного материала

Система сертификации посадочного материала винограда, принятая в странах Евросоюза, включает четкие организационные схемы, строгие технологические требования и нормативные документы, обеспечивающие выращивание посадочного материала высших категорий.
Посадочный материал винограда большинства европейских государств подразделяется на три категории: исходный или клоновый, базовый и сертифицированный. Эти категории имеют одинаковый санитарный статус и определены технологическими этапами размножения клонов винограда.
Начальным этапом размножения клонов является исходный клоновый материал. Этапом массового размножения является базовый посадочный материал, происходящий из клопового. При размножении базового, доводя его объемы до производственного, получают сертифицированный посадочный материал. Сертифицированный посадочный материал винограда, согласно правилам Евросоюза, должен отвечать следующим требованиям:

  1. клоновое происхождение, свободное от скрытого поражения вирусами;
  2. использование подвоя и привоя одинаковых категорий, так как более низкие категории понижают статус привитого саженца.

3.7. Технология производства корнесобственных сертифицированных саженцев винограда

Базисный маточник перспективных сортов винограда с групповой устойчивостью (к морозу, болезням, филлоксере) отечественной и зарубежной селекции с целью получения корнесобственного посадочного материала винограда закладывался на иммунных песках по аналогичной технологии, что и предыдущие базисные маточники подвойных и привойных высокоценных сортов винограда, описанных выше, со схемой закладки 3 м х 0,5 = 6600 растений на 1 га оздоровленными вегетирующими саженцами.
Технология формирования и ухода за маточными кустами и укрывки на зиму в первый год так же соответствовала формированию и уходу за кустами маточника привойных лоз. В первый же год установили опору с пятипроволочной шпалерой под заводку.
Весной второго года пневмоагрегатом производили открывку пришпиленных рукавов. С наступлением теплой погоды глазки на рукавах трогаются в рост и интенсивно растут.
Площадь базисных маточников сортов винограда с групповой устойчивостью толерантных к филлоксере делится на три части аналогично разбивке маточника подвойных лоз и состоит из трех полей. Первое поле предназначено для получения корнесобственного посадочного материала с окоренением побегов в валу. Второе поле используется для размножения глазками, зелеными и вызревшими черенками, заготовки, выращивания сертифицированного посадочного материала в теплицах и открытом грунте. Третье поле используется как страховое, один год для производства черенков, второй год для производства корнесобственного посадочного материала, окоренения в валу.
Когда зеленые побеги достигают 60 см, у основания узла побега проводим кольцевание, следом их окучивают механическим путем тракторным агрегатом ПРВН-3, создавая вал 30-35 см. По образовавшимся бороздам в течение вегетации проводим трехкратный полив, поддерживая хорошую влагоемкость вала для роста и развития корневой системы. В течение вегетации на побегах производим пасынкование и завод кустов между проволок. За вегетацию длина их достигала 1,2-2,5 м.
Осенью, когда лоза вызреет, производим разокучивание пневмоагрегатом и следом срезаем корневую систему длиной 15-25 см и побег ниже кольцевания на 2-3 см. Таким образом получаем корнесобственный саженец. Верхний прирост лозы срезаем на высоте 70 см, а остальную часть прироста используем на заготовку черенка для дальнейшего выращивания оздоровленного посадочного материала в школке.

3.8. Технологий производства привитых сертифицированных саженцев винограда на песках

Для ускоренного получения привитого сертифицированного посадочного материала высших категорий использовался базисный маточник подвойных лоз. С целью гарантированного ежегодного получения высококачественных саженцев и черенков, площадь заложенных маточников подвойных лоз делится на 3 части и состоит из трех участков (полей). Каждый из участков выполняет определенные задачи.
Первый участок предназначен для проведения прививок глазком с пробуждением и спящим глазком, окоренения лоз на маточном кусте (после получения окорененных саженцев данный участок поля в следующую вегетацию не используется под прививку).
Второй участок предназначен для выращивания подвойных лоз и заготовки черенков с использованием данной площади в следующую вегетацию под прививку и окоренения лоз на маточном кусте.
Третий участок является страховой частью для выращивания подвойных лоз заготовки черенка. При необходимости используется для прививки и получения сертифицированных привитых саженцев.
Начиная со второго года вегетации, на базисных маточных кустах проводили зеленую прививку (на растущие побеги окулировкой вприклад глазком с пробуждением и спящим глазком) нужного сорта черенками, заготовленными с базисного маточника привойных лоз сортов, используемых для высококачественного виноделия.
Основное назначение зеленой прививки окулировкой вприклад - выращивание привитого посадочного материала. Прививка осуществляется на побегах подвоя, которые достигают толщины не менее 5-6 мм. Окулировка вприклад глазком с пробуждением выполнялась на узле или междоузлиях зеленых побегов (на ребро) на высоте 52-60 см с третьей декады мая до конца июня, а с начала июля до середины августа - зелеными щитками спящим глазком.

3.9. Техника прививки

При выполнении прививок в период вегетации, когда физиологические процессы протекают очень интенсивно, а способность тканей к регенерации растений очень велика, достигается высокая приживаемость прививок и хорошее срастание подвоя с привоем.
Окулировка имеет самую высокую надежность и приживаемость, даже в засушливые годы у зеленых прививок приживаемость не снижается. Для окулировки подвойных побегов кусты готовят заранее, обламывают лишние побеги, оставляя 12-18-24 побега, которые равномерно распределяют в плоскости шпалеры, а также удаляют глазки в пазухах, не срезая листьев. Непосредственно перед прививкой с базисных маточников кустов привоя, предназначенных для размножения, заготавливаем необходимое количество зеленых побегов. На побеге удаляют травянистую верхушку, усики и половину листовых пластинок. Срезанные побеги привоя сразу помещают в ведро. Сверху его накрывают влажной мешковиной и доставляют к месту прививки.
Окулировку делаем как на узлах, так и междоузлиях «на ребро». Вначале вырезают паз на подвое на высоте 50-60 см. Отступив на 15 мм от основания глазка, под углом 45° делают надрез на глубину 2,2 мм. Переместив нож на 15 мм выше глазка, заглубляют его в кобиальный слой, поворачивают режущую кромку в сторону глазка, надрезают слегка древесину и копирующим узел движением опускают вниз до надреза. Аналогичным образом вырезают щиток на привое с хорошо развитой почкой. Вырезанный щиток по форме напоминает лыжу. Глубина паза и толщина щитка должны быть около 2-2,5 мм. Срезы на подвое и щитки привоя должны быть одинаковыми по ширине, длине и толщине. Щиток привоя, вставив в паз, начиная снизу вверх по часовой стрелке, обвязываем окулировку полоской полиэтиленовой пленки. При этом первый виток накладывают на основание щитка привоя. Открытым остается только глазок. Все операции проводятся быстро, не допуская подсыхания поверхностей срезов и их загрязнения. Обвязку снимают через 20-25 дней в зависимости от степени утолщения, когда привитые компоненты окулировки хорошо срастутся. На один побег, как правило, для гарантии прививается два глазка (рис. 4, 5).
Подготовка подвойных побегов к прививке
Рис.4. Подготовка подвойных побегов к прививке

Окулировка зеленым глазком с пробуждением и обвязка
Рис. 5. Окулировка зеленым глазком с пробуждением и обвязка

После проведения прививок на всей отведенной площади маточника, с целью окоренения побегов, образования полноценной корневой системы, ускоренного получения привитых саженцев, у основания подвойного побега под 2-3 узлом от почвы делаем кольцевание надрез коры по всей его окружности (рис. 6).
Подготовка подвойных побегов к кольцеванию
Рис. 6. Подготовка подвойных побегов к кольцеванию

По завершении этой работы на привитой площади производим окучивание ПРВН-3 плугом валом земли (песка) до 35 см и по образовавшимся бороздам производим обильный полив (рис. 7).
Окучивание кустов плугом ПРВН-3
Рис. 7. Окучивание кустов плугом ПРВН-3

За вегетационный период их поливают 2-3 раза. Для пробуждения глазка привоя в рост побег подвоя через 10-12 дней после окулировки, когда можно определить прижился глазок или нет, срезают на 2 узла выше места соединения щитка, не срезая листья. Неудачные прививки повторяются на этих же побегах в период с 20 июля по 10 августа спящим глазком. На прижившихся и хорошо развившихся привитых глазком побегах делают агротехнические уходы в виде пасынкования и опрыскивания, борьба с первыми осенними заморозками.
Осенью, когда вызреет лоза привоя (10-15 октября), тракторным пневмоагрегатом с ножом-рыхлителем и вертушкой производим разокучивание и открывку корневой системы Следом срезаем окорененные саженцы в валу, инвентаризируем, сортируем, связываем в пучки по 50 штук и упаковываем в полиэтиленовые мешки для временного хранения.
Таким образом, по разработанной нами технологии все операции, связанные с зеленой прививкой, выполняются в полевых условиях, не требующих специально оборудованных дорогостоящих прививочных мастерских, стратификационных камер, затрат на энергоносители и теплиц для доращивания на их производство. Одно звено прививальщиков из 10 человек обеспечивает получение привитых сертифицированных саженцев до 80-100 тыс. шт. с 1 га. Один прививальщик производит прививку в первый срок Окулировку глазком с пробуждением 200-300 в день, а за весь отведенный период в допустимые сроки. И во второй период выполнения работы окулировкой спящим глазком.
При уборке привитых саженцев каждый саженец срезают у основания подвойного побега ниже места кольцевания на 2.-3 см, где по всей окружности сформировалась хорошо развитая пяточная корневая система. Корни на пятке оставляют длиной 15-20 см и по всей длине, включая второй узел от основания. После среза уборки урожая саженцев производят их сортировку на саженцы двух видов:

  1. Привитые саженцы с годичным приростом нужного сорта.
  2. Привитые саженцы со спящим глазком нужного сорта, соответствующие требованиям европейского стандарта высших категорий.

Общее количество саженцев двух видов при инвентаризации, т.е. подсчете, составляет объем саженцев, полученных с 1 га, т.е. процент выращенных саженцев по отношению к количеству привитых побегов составляет 98-100 %.

Литература

    1. Инструкция по созданию элиты в виноградарстве Молдавской ССР / И. И. Гузун, П.Н. Недов, Л.И. Рубанов и др. - Кишинев: Тимпул, 1985. - 20 с.
    2. Методические рекомендации по клональному микроразмножению винограда! П.Я. Голодрига, В.А. Зленко, Л.А. Чекмарев и др. Ялта: ВНИИВиПП «Магарач», 1986.-57 с.
    3. Чекмарев Л.А. Аспекты физико-химической закономерности роста и развития и использование ее в питомниководстве (обсуждение гипотезы). / ВНИИВиВ «Магарач». - Ялта, 1990.-73 с.
    4. Пат. Украины 43191. Способ получения привитых саженцев, МКИ А 01 g 17/00:А 01 Н1/02 / Л.А. Чекмарев. - Заявл. 03.04.2001; Опубл. 15.11.2001. - Бюл. № 10. - 2 с.
    5. Чекмарев Л.А., Мелконян М.В. Роль и место прививки в ускорении селекции винограда. - ИВиВ «Магарач». - Ялта, 1999. - 13 с.
    6. Перстнев Н.Д. Виноградарство. - Кишинев, 2001. - 630 с.
    7. Дорошенко Н.П., Соколова Г.В. Промышленная технология производства оздоровленного посадочного материала винограда. - М., 2001. - С. 152-153.
    8. Кострикин И.А., Майстренко Л.А., Лященко А.А. Организация производства сертифицированных саженцев винограда в Российской Федерации // Промышленное производство оздоровленного посадочного материала плодовых, ягодных и цветочно-декоративных культур. - М, 2001. - 151 с.
    9. Чекмарев Л.A. Методика ускоренного создания привитых маточников винограда // Виноградарство и виноделие. - Ялта, 2003. - С. 52-55.
    10. Странишевская Е.П., Якушина Н.А. Вирусные заболевания винограда на юге Украины // Виноградарство и виноделие. - Ялта, 2003. - С. 56-62.
    11. Л.М. Малтабар. Руководство по производству прививок на месте. - Краснодар, 1989.
    12. Захарова Е.И. Рекомендации по выращиванию саженцев винограда. - М.: Колос, 1969,- 14 с.

По материалам конференции: Современные достижения биотехнологии в виноградарстве и других отраслях сельского хозяйства, Новочеркасск, 29-30 июня 2005 г. / ГНУ ВНИИВиВ им. Я.И. Потапенко.