Определение азота обычно проводится макро- и микрометодами. Но они требуют много времени для выполнения и применения специальных аппаратов, поэтому их пытались заменить другими методами. Так, например, после мокрого сжигания вместо от гонки образовавшегося аммиака и последующего титрования можно сразу оттитровать аммиак в колбе. Для этого используют гипохлорит или гипобромит.
Расход окислительного раствора, который соответствует количеству титруемого аммиака, измеряется йодометрическим методом.
Но этот метой не получил широкого распространения, во-первых, потому, что окислительные растворы неустойчивы, во-вторых, необходимо установить оптимальные соотношения количества азота в объекте и количества окислительного раствора, в-третьих, присутствие некоторых тяжелых металлов в среде мешает определению.
Благодаря некоторым работам стало известно, что во время мокрого сжигания из применяемых катализаторов только ртуть и ее соли не мешают определению аммиака.
Для устранения неустойчивости окислительных растворов некоторые авторы (Колтгоф и др., 1835) воздействуют устойчивыми растворами кальция гипохлорита и хлорамина Т на соответствующие вещества, вызывая каждый раз образование в среде свежего гипобромита, который и окисляет аммиак. Другие исследователи (Смит и др., 1962) в окислительных растворах дают большой излишек натрия бромида для увеличения устойчивости раствора и устранения действия ртутных солей. Некоторые готовят устойчивый раствор при помощи гидроокиси натрия и брома. Все эти методы имеют те или иные недостатки.
Необходимо модифицировать существующие объемные макрометоды определения азота так, чтобы можно было пользоваться микрометодом применительно к любым растительным объектам с учетом положительных и отрицательных сторон перечисленных методов.
В связи с этим нами была проведена серия определений для уточнения способа мокрого сжигания объекта и для установления оптимального соотношения между количеством азота в объекте и объемом окислительного раствора. Мокрое сжигание азота производилось в присутствии солей ртути. Нами установлено, что во время макро- и микросжиганий процент ошибки одном и тот же.
Для окисления малых количеств аммиака некоторые авторы готовили специальный раствор без брома и гидроокиси натрия, который другие авторы употребляли для макроопределений.
Применение излишка окислительного раствора нежелательно, ибо расходуется большое количество оттитрованного раствора и затягивается определение
Поэтому нами прежде всего было уточнено оптимальное количество окислительного раствора для разных микроколичеств азота. Выяснилось, что для окисления (до 3,5 мг азота), находящегося в чистой минеральной соли, требуется 10 мл окислительного раствора. Для большого количества азота объем окислительного раствора нужно увеличить (рис. ). В растительных же объектах после мокрого сжигания для тех же количеств азота требуется больше окислительного раствора (табл.). Если в первом случае на 1 мг азота требуется минимум 3 мл окислительного раствора, то во втором случае - 10-12 мл.
Соотношение азота и окисляющего раствора (химически чистая соль).
Результаты при различном соотношении окисляющего раствора (в объекте после сжигания)
Нами предлагается следующий микрометод определения азота в растительных объектах.
Навеска, содержащая до 1 мг азота, подвергается мокрому сжиганию в присутствии 0,1 г ртути, 2-3 г S04 и 5 мл концентрированной серной кислоты. После сжигания содержимое колбы Кьельдаля переносят в коническую колбу с притертой пробкой, где и производится нейтрализация 30-процентным едким натрием в присутствии нескольких капель 0,5-процентного метилрота.
После нейтрализации раствор охлаждают до комнатной температуры, прибавляют 10 мл окислителя и ставят на 10 минут в темное место. Затем добавляют 20 мл 2 н. серной кислоты, 10 мл 10-процентного йодистого калия (если азота много, нужно брать 20-процентный раствор йодистого калия). Освобождающийся йод титруют 0,1 н. раствором гипосульфита в присутствии небольшого количества 1 -процентного раствора крахмала.
То же самое проделывают с контролем, который содержит только 10 мл окислителя. Разницу в количествах израсходованного на опыт и контроль гипосульфита умножают на 0,4662 и получают количество мл азота в навеске.
Приготовление гипобромита (окисляющего раствора) проводят следующим образом: 16 г N аОН (х.ч.) растворяют в 40 мл воды, охлаждают, прибавляют из бюретки 4 мл брома и объем доводят водой до 1 литра. Раствор хранят в темной склянке с притертой пробкой.
Количество азота в образце рассчитывают следующим образом: А 0,4662 (B1 - В2).
где А - мг азота в навеске;
B1-объем израсходованного гипосульфита н./10 на контроль;
B2 -объем гипосульфита на опыт.
Полученное количество азота можно выразить в различных единицах, лучше в мг на 1 г сухого вещества.
Для определения белкового и небелкового азота производят следующие операции: белки осаждают. Затем производят мокрое сжигание отмытого осадка и фильтрата (для определения белкового и небелкового азота). Дальнейшее определение азота проводят по указанной методике.
Таким образом, разработан микрометод определения азота в растительных объектах без перегонки аммиака, прямо титрованием в растворе.
