За 2—3 дня до распускания цветков или в начале цветения соцветия отцовских форм собирают и раскладывают рыхлым слоем на бумаге в сухом помещении для просушивания. На листах бумаги с разложенными соцветиями обязательно указывается сорт, с которого они были собраны, и дата сбора. Через 1—2 дня слегка подсушенные соцветия перетирают руками. Все отделившиеся гребни соцветий удаляют, а бутоны продолжают сушить. Хорошо подсохшие и тщательно перетертые руками цветки просеивают через мелкое шелковое сито и отделившуюся пыльцу ссыпают в пробирки или пергаментные пакеты, которые хранят в темноте в эксикаторе с хлористым кальцием до момента опыления (рис. 64). При отсутствии шелкового можно использовать обыкновенное волосяное сито.
Рис. 64. Хранение пыльцы в эксикаторе с хлористым кальцием.
Если не предусматривается закладка точного опыта, то пыльцу можно собирать незадолго до опыления с распустившихся соцветий (без удаления их с кустов) путем стряхивания пыльцевых зерен на бумагу.
При подготовке пыльцы нельзя допускать смешения разных ее сортов, а поэтому после каждого сорта руки и сито необходимо протирать спиртом, а пыльцу различных сортов размещать в разных комнатах или в разных углах одной большой комнаты, окна которой в период хранения пыльцы должны быть закрыты, чтобы избежать переноса ее ветром и смешения.
При закладке методических опытов по скрещиванию с целью изучения наследования потомством отдельных признаков и свойств требуется особая точность. Поэтому на отцовские соцветия, так же как и на кастрированные материнские, за 3—5 дней до цветения одевают изоляторы для предупреждения попадания на них посторонней пыльцы.
Известно, что пыльца винограда различных сортов может сохранять достаточную жизнеспособность в течение двух месяцев при условии хранения ее в эксикаторе. Е. Б. Ивановой установлено, что пыльца, хранящаяся в комнатных условиях, на столах, быстро теряет свою жизнеспособность и на 17—20 день после сбора становится практически негодной для опыления. Согласно нашим исследованиям, пыльца винограда, хранившаяся в течение года в эксикаторе с хлористым кальцием при комнатной температуре, практически теряет жизнеспособность, однако единичные пыльцевые зерна оказываются способными к прорастанию.
В селекционной практике часто применяют пересылку пыльцы различных сортов из одних виноградарских районов в другие, где не культивируются интересующие селекционера сорта. Пересылать пыльцу лучше всего в бумажных пакетах, вложенных в пробирки с хлористым кальцием, закрытые ватными пробками. При отсутствии хлористого кальция, пыльцу помещают в пергаментные пакеты и отсылают в обыкновенных почтовых конвертах. Таким образом, селекционер может использовать пыльцу, заготовленную на месте и присланную из других районов с другими климатическими условиями.
В последнем случае, прежде чем применять пыльцу для опыления соцветий, необходимо определить ее жизнеспособность путем проращивания во влажных камерах общепринятым способом. Простейшая камера представляет собой предметное стекло, к центру которого приклеен стеклянный цилиндр высотой 0,3—0,5 см. Камеру можно сделать из воска или парафина и приплавливать ее к предметному стеклу. При отсутствии специальных камер предметные стекла с посеянной на капле питательной среды пыльцой помещают в чашку Петри, на дно которой укладывают влажную фильтровальную бумагу.
Питательную среду для проращивания пыльцы готовят непосредственно перед употреблением, для чего растворяют 4 г сахарозы (или товарного сахара), 1—2 г желатина в 25 мл дистиллированной воды. При этом желатин помещают на 1—1,5 часа в небольшое количество воды, а сахар растворяют отдельно, затем все сливают в колбочку, помещают ее в сосуд с водой и доводят содержимое до кипения. Охлажденная, но еще не застывшая питательная среда готова к употреблению.
А. Н. Добровольский рекомендует добавлять к раствору сахара небольшое количество пасоки того же сорта виноградной лозы, которому принадлежит пыльца, так как содержащиеся в ней органические и минеральные вещества благоприятно влияют на ход прорастания пыльцевых зерен.
Еще лучшие результаты будут получены при добавлении к каплям питательной среды жидкости, выделяемой рыльцами цветков винограда в процессе цветения.
Перед посевом каплю питательной среды наносят на покровное стекло так, чтобы она не расплывалась, и осторожно, не допуская комочков, стряхивают на нее с кончика препаровальной иглы исследуемую пыльцу. На дно камеры помещают каплю дистиллированной воды, края ее смазывают вазелином, а затем быстрым движением опрокидывают покровное стекло с каплей питательной среды и посеянной пыльцой. Предметное стекло с камерой и наклеенной этикеткой, где указаны сорт пыльцы, дата и час посева, помещают в термостат и оставляют на сутки при температуре 28—30°. При благоприятных условиях прорастание пыльцы начинается в первые часы после посева. Через 6—12 часов препараты просматривают под микроскопом и подсчитывают процент проросших в трубочки пыльцевых зерен в четырех противоположных зонах капли (рис. 65).
Рис. 65. Пыльца винограда:
1—слева: вид пыльцы обоеполых и мужских цветков: справа: вид пыльцы функционально женских цветков; 2—слева: вид проросшей в трубочки пыльцы обоеполых цветков винограда: справа: вид непроросшей пыльцы обоеполых цветков, непригодной для оплодотворения (по М. П. Цебрию).
Данные по каждой из двух-трех повторностей заносят в журнал и подсчитывают средний процент прорастания пыльцы. Чем ниже жизнеспособность пыльны, тем в больших количествах ее наносят на кастрированные цветки. Пыльца, потерявшая жизнеспособность, для опыления не пригодна.
