Методика оценки сеянцев при отборе по содержанию красящих веществ

Исследованиями многих отечественных и зарубежных ученых показано, что способность сорта накапливать красящие вещества является биологической особенностью, влияющей на скорость созревания и качество красных вин. При технологическом изучении оценку сорта по накоплению красящих веществ, как правило, дают на основе определения интенсивности окраски вин.
В оценке сорта или сеянца по признаку накопления красящих веществ такой подход недостаточно объективен. Поэтому и особенно для селекционных целей необходимо разработать метод количественного определения красящих веществ в ягодах винограда.
Известно, что для определения красящих веществ в винах разных сортов используют фотометрический метод (Н.Н. Простосердов, 1848; С.В. Дурмишидзе, 1948; А.В. Короткевич, 1948).
В настоящее время фотометрия широко применяется Для изучения многих жидких сред, характеризующихся определенным уровнем окраски, в том числе и вина. Изучив зависимость между экстинкцией и концентрацией вещества в растворе, А.В.Короткевич показал, что между этими величинами существует постоянное количественное соотношение при определении красящих веществ фотоколориметрическим методом. Особенно точно определяется эта связь при величине эксинкции в пределах 0,3-0,6.
На основе фотометрического принципа определения плотности растворов разработан и предлагается следующий метод количественного определения красящих веществ в урожае винограда исходных форм и сеянцев.
Отбор проб для анализа. Первые пробы отбирают в   момент появления окраски ягод. Последующие определения проводят через каждые 10 дней до наступления периода снижения, количества красящих веществ в ягодах. Первичный отбор по признаку содержания красящих веществ рекомендуется проводить, когда содержание сахара в ягодах достигнет 20%.
Для анализа достаточно отобрать 100 ягод. Число ягод с каждой грозди отбирают в зависимости от их количества на кусте. Например, если на сеянцах имеется 10 гроздей, то с каждой грозди нужно взять 9- 10 ягод в верхней, нижней и средней ее части. При этом учитывают расположение грозди на кусте и ягод в грозди. Чтобы избежать потери красящих веществ, ягоды аккуратно срезают ножницами.
Подготовка к анализу. Красящие вещества в ягодах большинства сортов винограда накапливаются в кожице» Есть сорта, у которых красящие вещества имеются как в кожице, так и в соке ягод. Отобранные 100 ягод моют и взвешивают.
Сусло из ягод отжимают при помощи небольшого пресса из дюралюминия, что устраняет потери красящих веществ за счет адсорбции. Измеряют объем сока, полученного из 100 ягод, 10-15 мл осветляют на центрифуге ЦЛН-20 (6 тыс.об/мин.) в течение 15 минут. Затем осветленное сусло фотоколориметрируют при зеленом светофильтре, определяя его экстинкцию. Кожицу после прессования отделяют от семян, очищают от мякоти, взвешивают и растирают в фарфоровой ступке
с 3 г кварцевого песка. Из полученной кашицеобразной массы берут навеску 5 г, помещают в бюкс с при - тертой пробкой емкостью 100-150 мл, добавляют 15 мл воды и кипятят на водяной бане 5 минут при помешивании. Затем в бюкс добавляют 25 мл этилового спирта (96% абс.) и 7,5 мл 10-процентного раствора винной кислоты. Бюкс закрывают крышкой и выдерживают на водяной бане 50-60 минут при температуре 60-70 С. После охлаждения экстракт вместе с осадком переносит на стеклянный фильтр Ж-2, вмонтированный в колбу Бунзена, для фильтрации при помощи вакуума. Твердый осадок на фильтре промывают несколько раз подкисленным (pH—1-2) 20-процентным спиртовым раствором.
Элювиацию проводят небольшими порциями до полного обесцвечивания элювиата. Полученный экстракт переносят в мерную колбочку на 250 мл и доводят его объем до метки. Нужное количество экстракта, аналогично суслу, центрифугируют. Экстинкцию экстракта также определяют фотоколориметром при зеленом светофильтре.
Составление калибровочной кривой. Фотоколориметрирование и расчет количества красящих веществ в 100 г ягод, которое выражается в мг искусственного красного красителя. Для этой цели составляют калибровочную кривую по стандартному раствору: 0,1 г фуксина, 0,5 г соли натриевой ализариновой и 0,00125 г метилового зеленого красителя растворяют в 100 мл 50—процентного этилового спирта. Этот раствор содержит 1 г/л красного красителя.
Нами установлено, что экстинкция сока и вытяжек, получаемых описанным выше методом, из различных сортов при зеленом светофильтре и кюветке 0,3 см³ варьирует в пределах от 0,1 до 1,8, что соответствует. концентрациям от 10 до 160 мг/л красного красителя. В связи с этим калибровочную кривую нужно составить следующим образом: из маточного раствора 1 г/л) отбирают 1,2,3,4... 10 мл, переносят в колбочку на 100 мл и каждый раз доводят до метки. В одном литре таких растворов соответственно будет 10, 3,30,40,.. и 160 мг красного красителя. Фотометрируя каждый из растворов, определяют их экстинкцию.
[а основании полученных данных составляют калиброочную кривую  для каждого фотоколориметра через определенные промежутки времени проверяют.
Осветленное сусло фотоколориметрируют при зеленом светофильтре, кюветка-0,3 см, определяя его экстинкцию. Для этого берут три кюветки. В две из них наливают рабочий и в одну контрольный раствор. Контролем в этом случае служит дистиллированная вода. В оба пучка зеленого света фотоколориметра помещают рабочие растворы. Стрелку милливольтметра при помощи ручки-регулятора устанавливают на нуль. Шкалы левого и правого барабанов в это время также находятся на нулевом делении. После этого в пучок света пра - вого барабана вводят контрольный раствор (воду), стрелка милливольтметра отклоняется от нуля. Вращая лимб, стрелку снова приводят к нулю. Отсчет величины экстинкции производят по красной шкале левого барабана.
Определив экстинкцию сусла по калибровочной кривой, находят количество красящих веществ в 1 л анализируемого сока. Зная объем сусла из 100 ягод и их вес, вычисляют количество красящих веществ в соке. Обозначив количество красящих веществ в соке из 100 г ягод через А (мг), вес 100 ягод - С (г), объем сока из 100 ягод - V (л)»количество красящих веществ в 1 л сусла, найденное по калибровочной кривой
- у(мг), находим:
(1)
Осветленную на центрифуге вытяжку фотоколориметрируют, определяя экстинкцию. По калибровочной

Калибровочная кривая для определения красящих веществ.
кривой находят количество красящих веществ в 1 л экстракта, а затем вычисляют количество красящих веществ в объеме 250 мл, полученном из кожицы, входящей в 5 г растертой массы.
Сумма красящих веществ, в соке и кожице равна
общему количеству красящих веществ в 100 г ягод:
А2 = А + A1                                                    
Ниже приводим данные содержания красящих веществ в ягодах некоторых сортов и сеянцев.
Таблица
Содержание красящих веществ в ягодах сортов и сеянцев

Практическая ценность предлагаемого метода состоит в том, что с его помощью можно осуществить целенаправленный подбор исходных форм для скрещивания, а также отбор сеянцев на основе объективных показателей и устанавливать закономерности, наследования признака накопления красящих веществ в потомстве.