Подтверждение межродовой гибридизации винограда в процессе эволюции

В.А. Волынкин, д.с.-х.н., гл.н.с.;
В.А. Зленко, к.с.-х.н., н.с.;
В. В. Лиховской, к.с.-х.н., и.о. нач. отдела;
Н.П. Олейников, к.с.-х.н., вед.н.с.;
А.А. Полулях, к.с.-х.н., с.н.с.
отдел селекции, генетики винограда и ампелографии
Национальный институт винограда и вина «Магарач»

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ПОДТВЕРЖДЕНИЕ МЕЖРОДОВОЙ ГИБРИДИЗАЦИИ У ВИНОГРАДА В ПРОЦЕССЕ ЕСТЕСТВЕННОЙ ЭВОЛЮЦИИ

В процессе естественной эволюции произошло формообразование у винограда, а вся совокупность генофонда культуры, объединенного одним семейством, была дифференцирована на роды, подроды, виды и более мелкие таксоны. В настоящей публикации приводятся результаты экспериментальных исследований с привлечением биотехнологического метода in vitro (культуры недоразвитых зародышей) и искусственной полиплоидизации (использование колхицина) для получения отдаленных межродовых гибридов винограда. Использование такого общебиологического подхода позволило получить фертильные гибриды, это подтвердило возможность их получения в процессе естественной эволюции.

Ключевые слова: хромосома, скрещиваемость, культура тканей in vitro, изолированные недоразвитые зародыши, колхицинирование, полиплоидизация.

Развитие биологических наук и биотехнологических технологий в XX и XXI вв. позволяет получать формы растений, которые не удавалось получить ранее, используя только традиционный метод генеративной гибридизации.
Получение таких «нетрадиционных» форм растений возможно либо на основе методов генной инженерии, либо на основе использования биологического потенциала самих растений, который заложен в них в процессе естественной эволюции. Эволюция у представителей родов семейства Vitaceae происходила в различных эколого-географических условиях, на разных континентах под воздействием определенных биотических и абиотических факторов отбора и возможности естественной скрещиваемости. Если виды подрода Euvitis скрещиваются между собой легко, то получить гибриды между видом V. Vinifera (подрод Euvitis, 38 хромосом) с видом V. Rotundifolia Michaux (подрод Muscadinia, 40 хромосом) удалось с большим трудом [12]. Эти гибридные сеянцы стали фертильными только после их полиплоидизации (аллотетраплоидии) [13].
Г.Д. Карпеченко в 1922-1924 гг. экспериментально доказал возможность получения фертильных межродовых гибридов редьки и капусты методом аллоплоидии (аллотетраплоидии) [5, 6]. Но даже у культур растений, роды которых представлены широким спектром полиплоидных рядов, при применении методов аллополиплоидии и культуры in vitro изолированных из семян зародышей для получения межродовых гибридов, связано с большими трудностями из-за несовместимости различных родов, принадлежащих к одному семейству растений, на генетическом (генетически нестабильных) и физиолого-биохимическом уровнях [7, 9]. Также генетически нестабильными являются межродовые соматические гибриды, полученные в результате слияния протоплостав в культуре in vitro [3].
До наших исследований в мире не было успешных результатов по искусственной межродовой гибридизации у семейства Vitaceae [15].
Создание межродовых гибридов у винограда (хотя бы с частичным присутствием генов различных родов из-за возможной элиминации хромосом одного из них) позволит получить качественно новые иммунные к биотическим и устойчивые к абиотическим факторам среды генотипы винограда, урожай которых может иметь новое направление использования в фармакологической и парфюмерной промышленности.

Целью исследований являлось получение методом аллотетраплоидии межродовых гибридов в пределах семейства Vitaceae: скрестить род Vitis (V. vinifera) c родами Ampelopsis (A. acontifolia, A. cordata и A. serjanieafolia ) и Parthenocissus (P. inserta и P. quinquefolia). Специфичность эксперимента заключалась в создании впервые в мире гибридов между сортами V. Vinifera (род Vitis, 2n =38 хромосом) и видами других родов (Ampelopsis и Parthenocissus, 2n = 40 хромосом) семейства Vitaceae: Ampelopsis acontifolia Lavalee, Ampelopsis cordata Michaux, Ampelopsis serjanieafolia Regel, Parthenocissus inserta Fritch и Parthenocissus quinquefolia Planch [1].

При проведении исследований ставились следующие задачи:

1. обработать 0,5%-ным колхицином распускающиеся почки (0,5-1 см) на однолетней вызревшей лозе, а также обработать колхицином в 3-х концентрациях (0,5; 1 и 2%) соцветия винограда родов Vitis, Ampelopsis и Parthenocissus за 5-14 дней до начала мейоза в клетках генеративных органов с целью образования полиплоидных гамет;
2. провести инцухт у обработанных колхицином представителей различных родов и выделить семена из ягод с целью получения полиплоидных сеянцев и после вступления их в плодоношение провести скрещивания между ними;
3. после обработки колхицином распускающихся почек и соцветий перед мейозом скрестить род Vitis (вид V.vinifera) с видами родов Ampelopsis и Parthenocissus, выделить из зеленых ягод незрелые семена (25, 30, 40 и 50 дней после опыления) и высадить в культуру in vitro недоразвитые зародыши семян для преодоления физиолого-биохимической несовместимости между родами на стадиях развития зародышей и растений из них в культуре in vitro;
4. высадить на адаптацию к условиям in vivo в гидропонную культуру в теплицу растения - сеянцы, развившиеся из зародышей в культуре in vitro, которые выделены из незрелых семян (40 дней после межродовой гибридизации) и к концу вегетации вырастить из них мощные растения для пересадки в полевые условия;
5. высеять в гидропонную культуру в теплице семена (полученные от различных вариантов: обработка колхицином начавших развиваться побегов -  0,5-1 см, а также соцветий до мейоза, инцухт, контроль - свободное опыление) различных родов для получения полиплоидных форм, а также высев семян, полученных в результате межродовой гибридизации;
6. высадить на постоянное место в поле сеянцы, полученные в вариантах после обработки колхицином, отобранные по анатомо-морфологическим признакам, а также сеянцы, полученные в результате межродовой гибридизации и развившиеся из зародышей в культуре in vitro.

Применялся традиционный путь преодоления генетической несовместимости при межродовой гибридизации (разного количества диплоидного набора хромосом у исходных форм), заключающийся в методе аллополиплоидии - использовании для скрещивания полиплоидных родительских форм. Наличие парных хромосом каждого рода у гибридных сеянцев необходимо для конъюгации между хромосомами в процессе прохождения мейоза и образования гамет, что может обеспечить фертильность гибридных сеянцев [8].
С целью получения межродовых гибридов методом аллополиплоидии (обработка растворами колхицина начавших распускаться вызревших почек и соцветий за 5-14 дней до начала мейоза для образования полиплоидных гамет) исследования проводили по двум направлениям:

1. инцухт у представителей различных родов для получения из семян сеянцев-тетраплоидов и затем, после вступления в пору плодоношения, провести межродовые скрещивания тетраплоидных сеянцев;
2. для ускорения межродовой гибридизации: после обработки колхицином возможно образование полиплоидных гамет (яйцеклетки и пыльцы). Поэтому проводились скрещивания между обработанными колхицином родительскими генотипами- представителями различных родов.

Так как в семенах, полученных в результате межродовой гибридизации, наблюдается гибель зародышей из-за физиолого-биохимической несовместимости различных родов, были собраны незрелые ягоды 25, 30, 40 и 50 дней после гибридизации, которые хранились в холодильнике в течение 8-12 недель при -2°С. Затем из ягод были выделены семена, стерилизованы 10%-ным «Доместас» в течение 12-15 мин, затем 96%-ным спиртом - 10-20 сек и промыты 4-5 раз стерильной водой. Семена в чашках Петри в ламинарном боксе были разрезаны поперек и носики семян (части семян, в которых находятся зародыши) были высажены в три варианта жидкой среды, различающихся между собой содержанием регуляторов роста: 0,2 мг/л БАП для развития сердцевидных зародышей из глобулярных; 0,1 мг/л β- индолилуксусной кислоты (ИУК) и 30 мг/л гумата Na для превращения сердцевидных зародышей в торпедовидные; 0,2 мг/л гибберелловой кислоты (ГК3) для развития проростков с зелеными семядолями и гипокатилями из торпедовидных зародышей. Основа жидкой среды состояла из среды для размножения растений [4] следующего состава макроэлементов: 308 мг/л NH4NO3, 922 мг/л KNO3, 597 мг/л MgSO4-7H2O, 82 мг/л KH2PO4, 331 мг/л CaCl2; микроэлементы и Fe-EDTA [11], 20 мг/л мезо-инозита, 0,5 мг/л никотиновой кислоты и 10 г/л сахарозы, но с повышенным содержанием витаминов тиамина и пиридоксина (по 0,5 мг/л). рН каждого варианта среды перед автоклавированием (1атм, 25 мин) было доведено до 5,6 [2].
Проростки пересажены на питательную твердую среду для развития у них побегов и корней. Состав концентраций компонентов этой среды отличается от приведенной выше основы среды более низкой концентрацией витаминов (0,1 мг/л тиамина и 0,2 мг/л пиридоксина), добавкой 30 мг/л гумата Na, 7,5 г/л агара и концентрацией регуляторов роста: 0,15 мг/л ИУК, 0,005 мг/л б нафтилуксусной кислоты (НУК) и 0,001 мг/л БАП; значение рН было доведено NaOH до 6,0-6,2 перед добавкой агара и автоклавированием.
Отбор полиплоидных генотипов по анатомо-морфологическим признакам у сеянцев, полученных в результате инцухта после обработки начавших распускаться вызревших почек или соцветий растворами колхицина до начала мейоза проводился по методике Топалэ [10].

Обработка распускающихся почек и соцветий перед мейозом колхицином каждую весну 2006-2009 гг.

Получить межродовые гибриды у растений можно методом аллотетраплоидии: скрещивания исходных генотипов-представителей различных родов. С целью образования тетраплоидных сеянцев у представителей различных родов, весной в 2006-2008 годах распускающиеся почки размером 0,5-1 см были обработаны 0,5%-ным раствором колхицина, а в 2009 г. предварительно, за 17-25 дней перед цветением (514 дней до начала мейоза), соцветия были обработаны колхицином в трех концентрациях: 0,5; 1 и 2%, с добавкой биологически активных веществ (основа растворов колхицина): 0,5 мг/л 6-бензиламинопурина (БАП), 40 г/л Д-манита, 2 мл/л димексида, 0,5 мл/л Твина 20 и 200 мг/л Na-бензоата; рН=5,6.

Обработка распускающихся почек, а также соцветий перед мейозом вариантами концентраций колхицина (0,5; 1 и 2%) была проведена у родов: Ampelopsis (виды Ampelopsis acontifolia, Ampelopsis cordata и Ampelopsis serjanieafolia), Parthenocissus (виды Parthenocissus inserta и Parthenocissus quinquefolia) и Vitis (V. vinifera миксоплоидные обоеполые сорта - Харти про Ливье, Пикпуль черный, Шабаш крупноягодный и Яхеи с женским типом цветка, а также склонные при определенных условиях выращивания к миксоплоидии - Мускат александрийский, Шабаш и Рислинг рейнский). Затем у этих представителей различных родов был проведен инцухт (всего 24 соцветия).
Первое направление исследований: инцухт у обработанных колхицином соцветий генотипов различных родов для получения полиплоидных сеянцев и после вступления их в пору плодоношения -  проведение межродовых скрещиваний.
В результате инцухта после обработки соцветий колхицином у вышеперечисленных генотипов получены семена (контроль - свободное опыление), всего - 10800 шт. семян. Семена рассортированы по размерам, так как по данным Ш.Г. Топалэ [10], полиплоидные семена по размерам больше, чем диплоидные, и в 2010 г. высеяны в теплицу для отбора полиплоидных сеянцев по анатомо-морфологическим признакам по методике Топалэ [10]. После вступления в пору цветения между выделенными по морфологическим признакам и методом цитогенетического анализа тетраплоидными сеянцами различных родов будет проводиться межродовая гибридизация.
С целью получения полиплоидных форм (обработка колхицином распускающихся почек каждую весну в 2006-2008 гг., и в 2009 г.) были обработаны растворами колхицина (0,5; 1 и 2%) соцветия за 17 -25 дней до цветения (до начала мейоза), контроль - без обработки). Каждую весну в 2007-2010 гг. в теплицу с гидропонной культурой высевали семена скрещиваний 2006-2008 гг., рассортированные по размерам, следующих генотипов (инцухт, контроль - свободное опыление): Ampelopsis acontifolia (2568 шт.), Ampelopsis cordata (3795 шт.), Ampelopsis serjanieаfolia (1723 шт.), Parthenocissus inserta (2464 шт.) и Parthenocissus quinquefolia (951 шт.); у тетраплоида Шасла Гро Куляр белая (313 шт), и у миксоплоидных сортов рода Vitis вид V. vinifera: Харти про Ливье (2489 шт.), Пикпуль черный (4526 шт.), Шабаш крупноягодный (2373 шт.), Шабаш (1244 шт.), Рислинг рейнский (123 шт.), Баян Ширей (инцухт - 256 шт.) и Мускат александрийский (70 шт.), Яхеи (женский тип цветка, миксоплоид, колхицин, свободное опыление) - 50 шт., а также семена, полученные в результате скрещивания Яхеи х Ampelopsis acontifolia (колхицин) - 115 шт. и Яхеи х Ampelopsis cordata (колхицин) - 10 шт. семян (вырос 1 сеянец с вызревшей лозой 19 см) и Яхеи х Parthenocissus inserta (колхицин) - 28 шт. В конце вегетации каждой осенью в 2007-2010 гг. по анатомоморфологическим признакам полиплоидов [10] и межродовых гибридов отбирали среди них 242 сеянца для высадки на постоянное место в поле с целью дальнейшего изучения.

Второе направление исследований: проведение скрещиваний между генотипами - представителями различных родов, у которых предварительно обработаны колхицином начавшие распускаться вызревшие почки или соцветия перед началом мейоза для образования диплоидных гамет (яйцеклеток и пыльцы) и затем гибридных сеянцев - аллотетраплоидов.

В 2006-2010 гг. в культуру in vitro были высажены зародыши, выделенные из незрелых семян, которые получены после следующих межродовых скрещиваний (25, 30, 40 и 50 дней после опыления, семена разрезали пополам и носики семян с зародышами высаживали в жидкую среду): Шасла Рамминга х Ampelopsis acontifolia (16 шт.), Шасла Рамминга х Parthenocissus inserta (45 шт.), Шасла Гро Куляр белая х Ampelopsis acontifolia (48 шт.), Шасла Гро Куляр белая х Ampelopsis cordata (82 шт.), Шасла Гро Куляр белая х Parthenocissus inserta (11 шт.), Пикпуль черный х Ampelopsis acontifolia (306 шт), Пикпуль черный х Parthenocissus inserta (445 шт.), Харти про Ливье х Ampelopsis acontifolia (578 шт), Харти про Ливье х Ampelopsis cordata (87 шт.), Харти про Ливье х Parthenocissus inserta (185 шт.), Яхеи х Ampelopsis acontifolia (809 шт), Яхеи х Ampelopsis cordata (149 шт.), Яхеи х Parthenocissus inserta (571 шт.), Янтарный Магарача х Ampelopsis acontifolia (20 шт.). Всего 4411 шт. Также в культуру in vitro были высажены зародыши (носики семян) обработанных колхицином генотипов: Ampelopsis acontifolia (63 шт.), Parthenocissus inserta (64 шт.), Parthenocissus quinquefolia (56 шт.).
При разрезании семян перед высадкой на трех вариантах жидких сред были выявлены специфические сорто-биологические особенности. У сорта Яхеи при межродовой гибридизации образуются пустые семена (без зародышей и эндосперма); у сортов Шасла Гро Куляр белая и Харти про Ливье - как пустые семена, так и с эндоспермом, но проростки не развивались, а у сорта Пикпуль черный почти все семена были с эндоспермом, но при этом редко происходило развитие проростков и у них редко образовывались побеги. В результате скрещивания сорта Пикпуль черный с Ampelopsis acontifolia из 69 частей семян с эндоспермом после 40 дней культивирования на трех вариантах жидких сред выросло только 20 проростков (30%). При этом 17 из них были зелеными, у трех из которых развились побеги (21%). Три проростка были с белыми семядолями и гипокотилями (15% альбиносов от всех развившихся проростков). Из 72 частей семян с эндоспермом скрещивания Пикпуль черный с Parthenocissus inserta развилось меньше как проростков (2 зеленых и 1 белый проросток), так и побегов из них (1 побег). От скрещивания Хартии про Ливье х Ampelopsis cordata из незрелых зародышей (40 дней после опыления развилось 7 шт. сеянцев.
У всех семян с развившимся эндоспермом, полученных в результате межродовых скрещиваний в большей или меньшей степени был выражен некроз оболочек семян и эндосперма, что указывает на физиологическую несовместимость родов на биохимическом уровне [1].
Как на жидких средах, так и на твердой среде, на которую были пересажены проростки, наблюдается дальнейшее их аномальное развитие и рост побегов у некоторых из них.

Высадка в 2007-2010 гг. на адаптацию к условиям in vivo в гидропонную культуру в теплице растений -сеянцев, развившихся из зародышей в культуре in vitro, которые выделены из незрелых семян (40 дней после межродовой гибридизации) и выращивание из них стандартных саженцев.

С целью дальнейшего изучения и выделения истинных межродовых гибридов каждую весну 20072010 гг. на адаптацию в условия гидропонной культуры в теплицу высаживались сеянцы, полученные в культуре незрелых зародышей in vitro (семена завязались в ягодах, 40 дней после опыления, соцветия развились на побегах, после обработки почек колхицином) скрещиваний Харти про Ливье х Ampelopsis cordata - 7 сеянцев в 5-ти повторностях и Пикпуль черный х Ampelopsis acontifolia - 22 сеянцев в 3-5 повторностях каждый. Каждую осень в 2007-2010 гг. из этих сеянцев получали стандартные саженцы в 2-5-ти повторностях. У двух сеянцев скрещивания Харти про Ливье х Ampelopsis cordata сильно рассечены листья (рис.1 и 2) (признак рода Ampelopsis), и у одного лоза главного побега окрашена в красный цвет, что возможно свидетельствует о их гибридном межродовом происхождении.

Высадка каждой весной в 2007-2010 гг. на постоянное место в поле сеянцев, предположительно полиплоидных генотипов различных родов или межродовых гибридов.

Высажены весной 2007-2011 гг. на постоянное место в поле отобранные по морфологическим признакам мощные сеянцы (обработка колхицином распускающихся почек каждой весной 2006-2008 гг. и соцветий до начала мейоза в 2009 г. выращивание в гидропонной культуре в 2007-2010 гг.: Parthenocissus inserta - 39, Parthenocissus quinquefolia - 41, Ampelopsis acontifolia - 30 (1 вырос в культуре in virto, № 153), Ampelopsis cordata - 17, Ampelopsis serjanieаfolia - 7, Шасла Гро Куляр белая (инцухт) -  4, Пикпуль черный - 10, Харти про Ливье - 45, Янтарный Магарача - 7, Яхеи - 9, Яхеи (колхицин) х Ampelopsis cordata - 1, Баян ширей (инцухт) - 3, Шабаш (инцухт) - 10, Шабаш крупноягодный - 11, Рислинг рейнский - 10. Всего 244 сеянца 21 популяции различных родов семейства Vitaceae.
Также высажены на постоянное место в поле 7 сеянцев (обработка колхицином распускающихся почек весной 2007 г., выращивание зародышей в культуре in vitro, 40 дней после опыления и адаптация в гидропонной культуре в 2008 г.) из семян межродового скрещивания Харти про Ливье х Ampelopsis cordata. У двух из этих сеянцев сильно рассечены листья, как и у вида Ampelopsis cordata.
У сеянца, полученного в результате скрещивания Пикпуль черный (колхицин) х Ampelopsis acontifolia (колхицин), образуются многочисленные пазушные почки и побеги, сближенные узлы на побегах, что не наблюдается у исходных генотипов, участвующих в скрещивании. При этом у сеянца листья на верхушке побега и пасынковых побегов были сильно рассечены, а у остальных листьев листовая пластинка была менее рассеченной (рис. 3).

После вступления в пору цветения между тетраплоидными генотипами различных родов будет проведена межродовая гибридизация (род Vitis будет скрещен с родами Partenocisus и Ampelopsis. Параллельно у полиплоидных и диплоидных сеянцев сортов Vitis vinifera будут изучаться хозяйственно ценные признаки с целью выделения среди них кандидатов в сорта. Пять из этих сеянцев, выросших из отобранных крупных семян, полученных в результате свободного опыления трех видов рода Ampelopsis (распускающиеся почки у них были обработаны 0,5%- ным колхицином), заплодоносили на первый год развития в поле. 

Рис. 1. Листья исходных родительских форм Харти про Ливье и Ampelopsis cordata и полученного в результате их гибридизации сеянца

Рис. 2. Листья исходных родительских форм Пикпуль черный и Amelopsis acontifolia и полученного в результате их гибридизации сеянца

Рис. 3. Укороченные междоузлия и сильнорассеченный лист сеянца Пикпуль черный х Ampelopsis acontifolia

Из ягод этих сеянцев были выделены семена в следующем количестве: сеянец №173 - 1 Ampelopsis acontifoliа - 163 шт.; сеянец №175 - 1 Ampelopsis oerdata - 6 шт.; сеянцы №179 - 1, №181 - 1 и №184 - 1 Ampelopsis serganieаfolia - 3, 2 и 18 шт. семян соответственно. У сеянца №173-1 свободного опыления Ampelopsis acontifoliа листья по форме были такими же, как и у сеянца №175-1 свободного опыления Ampelopsis соrdatа. При этом зрелые ягоды сеянца №173-1 Ampelopsis acontifoliа были желтого цвета (у исходной материнской формы - синего цвета), но содержали такие же большие семена как у A. acontifolia. В синевато-зеленых ягодах сеянца №175-1 свободного опыления Ampelopsis cordata очень мелкие семена, что является признаком вида A. cordata. Возможно, сеянец №173-1 является гибридом между двумя видами рода Ampelopsis (A. acontifolia х A. cordata). Этот сеянец обладает очень мощным ростом и высокой засухо- и жаростойкостью по сравнению с другими сеянцами. В следующем году сеянец №173-1 A. acontifolia будет включен в межродовую гибридизацию с родом Vitis (V. vinifera).

Выводы.

1. В теплице, в гидропонной культуре для высадки на постоянное место в поле выращены сеянцы, полученные в результате межродовой гибридизации (начавшие распускаться почки были обработаны 0,5 %-ным колхицином; растения в культуре in vitro были выращены из зародышей, выделенных из зеленых ягод, 40 дней после опыления) следующих скрещиваний: Пикпуль черный х Ampelopsis acontifolia (11 сеянцев) в 3-5 повторностях) и Харти про Ливье х Ampelopsis cordata (2 сеянца в 4-х повторностях).
2. У сеянца скрещивания Пикпуль черный х Ampelopsis acontifolia, культивируемого в теплице, выросшего в культуре in vitro из незрелого зародыша (у исходных форм распускающиеся почки были обработаны 0,5%-ным раствором колхицина), образуются многочисленные пазушные почки и побеги с сильнорассеченными листьями на верхушке главного и пасынковых побегов, сближенные узлы главного и пасынковых побегов, что, возможно, связано с полиплоидией или присутствием генов различных родов.
3. Наблюдается плодоношение в первый год развития в поле у сеянцев свободного опыления (распускающиеся почки обработаны 0,5%-ным раствором колхицина) Ampelopsis acontifolia (№ 173-1); A. cordata (№175-1); и Ampelopsis serganiefolia (№ 179-1, № 181-1 и № 184-1). Собранные семена сеянцев свободного опыления этих видов рода Ampelopsis будут высеяны для дальнейшего отбора тетраплоидных сеянцев и их скрещивания с тетраплоидами рода Vitis. Включение вышеперечисленных сеянцев рода Ampelopsis в качестве отцовских форм с представителями рода Vitis позволит проводить отбор межродовых гибридов не только по форме листьев, но и по признаку раннего вступления в пору плодоношения (на первый год их развития в поле).
4. Два сеянца скрещивания Пикпуль черный х Ampelopsis acontifolia (распускающиеся почки, из которых затем выросли побеги с соцветиями, у исходных форм были обработаны 0,5%-ным раствором колхицина для образования диплоидных яйцеклеток и пыльцы, и образования диплоидных зигот) имеют признаки родов Vitis и Ampelopsis.
5. Проведено описание по ампелографическим признакам листа исходных форм, относящихся к различным родам семейства Vitaceae, и полученных от их скрещивания гибридов после полиплоидизации методом колхицинирования. Поскольку в качестве материнских форм были включены в гибридизацию сорта V. vinifera L. c нерассеченным листом и обладающие функционально женским типом цветка, то можно утверждать, что форму и рассеченность листа гибриды унаследовали от отцовской родительской формы. Следовательно, можно с большой степенью достоверности говорить о получении впервые в мире искусственным путем межродовых гибридов винограда. Окончательный вывод о присутствии генов двух родов у этих сеянцев можно будет сделать только после сравнительного молекулярногенетического анализа гибридных сеянцев и исходных материнских и отцовских форм, участвующих в скрещивании.
6. Значимость полученных гибридов винограда межродового происхождения заключается не только в том, что это удалось искусственным путем впервые в мире, но что подтверждены биологически обоснованные возможности возникновения таких форм от отдаленных скрещиваний в природе в процессе естественной эволюции.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Волынкин В.А., Зленко В.А., Полулях А.А., Лиховской В.В. Применение методов экспериментальной аллополиплоидии и культуры зародышей in vitro для получения межродовых гибридов у винограда (семейство Vitaceae) // Фактори экспериментальной эволюции организмов: Сб. научных трудов. — К.: Логос, 2009. — Т .7. — С.213 -217.
2. Волынкин В.А., Зленко В.А., Полулях А.А., Лиховской В.В. Селекция межродовых гибридов винограда семейства Vitaceae на основе применения методов экспериментальной аллополиплоидии и культуры зародышей in vitro // “Магарач”. Виноградарство и виноделие. - 2009, № 1. - С.12-14.
3. Глеба Ю.Ю., Сытник К.М. Клеточная инженерия растений. — К.: Наукова думка, 1984, 160 с.
4. Зленко В.А. Диагностика хозяйственно ценных признаков и клональное микроразмножение винограда in vitro: Автореф. дис. канд. с.-х. наук, Ялта, 1991. — 22 с.
5. Карпеченко Г.Д.. Полиплоидные гибриды Raphaus satieres L. х Brassika oleraceae L. // Тр. По прикл. ботанике, генетике и селекции, 1927, Т. 17, №3. — С. 393.
6. Карпеченко 1.Д.. Теория отдаленной гибридизации. — M.-Л.: Сельхозгиз, 1935. — 64 с.